Bertentangan dengan apa yang mungkin pertama kali dipikirkan, antibodi biotin bukanlah zat yang dibangkitkan melawan biotin. Sebaliknya, antibodi biotin adalah antibodi yang telah terkonjugasi dengan biotin. Biotin berikatan kuat dengan ligan — avidin — yang pada gilirannya dapat terkonjugasi menjadi molekul yang dapat dideteksi cahaya seperti fluorofor. Biotin dan avidin membentuk salah satu ikatan kovalen yang paling relevan secara biologis yang diketahui, membuat unit ligan/reseptor terkonjugasi biotin dan avidin sangat berguna dalam studi ilmiah.
Biotin adalah vitamin B kompleks — vitamin B7. Ini adalah molekul yang sangat kecil sehingga beberapa molekul biotin dapat dikonjugasikan menjadi antibodi monoklonal atau poliklonal tunggal. Fakta bahwa biotin juga larut dalam air memungkinkan fleksibilitas yang lebih besar dalam sistem buffer daripada jika tidak larut. Untuk spesifisitas yang lebih besar, konjugasi antibodi monoklonal ke biotin sering direkomendasikan daripada konjugasi antibodi poliklonal. Molekul biotin dapat langsung terikat dengan antibodi yang diinginkan, atau dapat dihubungkan melalui ekor molekul untuk memungkinkan lebih banyak kebebasan bergerak.
Ligan biotin avidin ditemukan dalam albumin telur. Itu dapat dibuat dengan murah dan mudah diisolasi. Beberapa molekul avidin akan mengikat setiap reseptor biotin, memperkuat sinyal deteksi antibodi tunggal. Ketika antibodi biotin melekat pada antigen yang diinginkan, peneliti kemudian dapat mengekspos kompleks tersebut ke avidin yang terkonjugasi dengan fluorofor, membuat kompleks tersebut dapat dideteksi. Melalui pencitraan fluoresen, antibodi biotin dan ligan terkonjugasi avidin dapat dideteksi dengan mikroskop cahaya, dan antigen yang diinginkan dapat dipelajari secara in situ.
Meskipun pembuatan dan penggunaan antibodi biotin dan molekul avidin yang ditandai dengan fluoresensi adalah solusi umum untuk deteksi antigen, ada alternatif yang masih menggunakan kompleks biotin/avidin. Mengikat biotin ke ligan seperti neurotoksin dapat bermanfaat dalam mendeteksi penempatan reseptor saraf yang dipengaruhi oleh neurotoksin yang bersangkutan. Juga dimungkinkan untuk mengkonjugasikan biotin ke urutan nukleotida seperti messenger ribonucleic acid (mRNA) untuk menemukan di mana urutan nukleotida ini diterjemahkan ke dalam protein atau untuk mendeteksi regulasi mRNA seluler.
Dimungkinkan untuk membeli antibodi poliklonal atau monoklonal terbiotinilasi, meskipun produksi antibodi terbiotinilasi berada dalam kemampuan banyak peneliti. Protokol dapat ditemukan secara online yang menyarankan metode biotinilasi antibodi, meskipun protokol yang paling mudah diikuti secara langsung menghubungkan biotin ke antibodi daripada menyarankan cara menyisipkan spacer molekuler. Spacer molekuler antara biotin dan antibodi terkait memungkinkan jarak yang lebih besar untuk mengekspos lebih banyak molekul ke situs pengikatan, dan antibodi biotin ini biasanya dibeli daripada dibuat.