Penduduk asli Amerika Iroquois adalah anggota suku Indian yang berasal dari Amerika Serikat bagian timur laut. Awalnya, tanah air mereka berada di antara Air Terjun Niagara dan Pegunungan Adirondack di tempat yang sekarang menjadi bagian utara New York. Lima suku awalnya membentuk bangsa Iroquois: Seneca, Mohawk, Onondaga, Cayuga, dan Oneida. Pada 1722, suku keenam, Tuscarora, bergabung dengan mereka dan menjadi bagian dari bangsa Iroquois. Melalui penaklukan dan migrasi, Iroquois akhirnya menguasai sebagian besar Kanada timur dan Amerika Serikat bagian timur laut.
Terikat oleh bahasa dan budaya yang sama, penduduk asli Amerika Iroquois bergabung bersama untuk membentuk Konfederasi Iroquois, atau Liga Iroquois. The Mohawk, atau “Orang-orang Flint,” menjaga bagian timur negara Iroquois; dan Seneca, “Orang Bukit Besar,” melindungi barat. Tersebar di antaranya adalah Cayuga, “Orang-orang Tanah Kotor;” the Oneida, “Orang-orang dari Batu Berdiri;” Onondaga, “Penjaga Api;” dan Tuscarora, “Orang Berbaju.”
Penduduk asli Amerika Iroquois awal adalah pemburu dan petani. Mereka tinggal di desa-desa permanen dan membangun rumah yang terbuat dari kulit kayu elm dan disebut rumah panjang. Panjang rumah panjang bisa lebih dari 200 kaki (60.96 meter), dan meskipun memiliki bukaan di kedua ujungnya, tidak ada pintu atau jendela. Suku itu tidak nomaden, dan desa-desa dipindahkan hanya ketika tanah menjadi habis — kira-kira setiap 20 tahun — atau untuk alasan pertahanan. Labu, kacang-kacangan dan jagung adalah tanaman utama mereka dan dianggap sebagai hadiah khusus dari pencipta mereka.
Peran gender di antara penduduk asli Amerika Iroquois dibedakan menurut garis tradisional dengan pengecualian bagaimana pemimpin suku dipilih. Laki-laki Iroquois bertanggung jawab atas perang, perdagangan, dan berburu, dan perempuan bertanggung jawab atas keluarga, pertanian, dan properti. Iroquois adalah masyarakat matrilineal yang dibagi menjadi klan, masing-masing diperintah oleh ibu klan yang membuat keputusan sumber daya dan tanah, tetapi kepala suku, yang membuat perjanjian perdagangan dan keputusan militer, semuanya laki-laki. Kepala suku dipilih melalui pemilihan demokratis yang diadakan hanya di antara perempuan yang merupakan ibu klan.
Secara umum, Iroquois dianggap sebagai kelompok penduduk asli Amerika yang paling penting selama era kolonial di Amerika Serikat dan Kanada. Ini sebagian besar karena sistem politik mereka yang unik. Konfederasi Iroquois adalah demokrasi berdasarkan konstitusi tertulis yang berfungsi sebagai hukum tertinggi dan sistem checks and balances yang rumit. Sejarawan mengakui bahwa kontak Eropa dengan sistem politik mereka secara langsung mempengaruhi perkembangan Anggaran Konfederasi dan Konstitusi AS.