Apa itu Uji Pergeseran Mobilitas Elektroforesis?

Assay adalah tes yang dirancang untuk memisahkan bagian asli sel menjadi bagian-bagian yang mudah diidentifikasi. Uji pergeseran mobilitas elektroforesis adalah eksperimen yang menggunakan listrik untuk memindahkan makromolekul, seperti protein, melalui matriks gel untuk menyebabkan pemisahan antara makromolekul yang berbeda berdasarkan ukuran. Seperti aki mobil, ujung negatif dan positif berada di sisi berlawanan dari uji perpindahan mobilitas elektroforesis, atau uji perpindahan gel. Hal ini menyebabkan listrik untuk menarik makromolekul berdasarkan muatan. Setiap makromolekul bergerak pada kecepatan yang berbeda, karena yang lebih kecil mengalami lebih sedikit gangguan dari gel.

Beberapa langkah diperlukan untuk menyiapkan uji pergeseran mobilitas elektroforesis. Makromolekul yang perlu dipisahkan harus disiapkan terlebih dahulu. Sebagian besar makromolekul diperoleh dari sel hidup dan memerlukan prosedur khusus. Mendapatkan bagian-bagian yang akan dipisahkan seringkali membutuhkan sentrifus dan reaksi kimia yang memecah sel. Centrifuge akan memutar botol dengan kecepatan tinggi dan membentuk pelet makromolekul yang dibutuhkan. Ini larut dan seringkali warna atau label lain ditambahkan untuk membantu melacak uji pergeseran gel.

Gel, kadang-kadang disebut tempat tidur, juga harus baru dibuat dari campuran yang tepat dari agarosa bubuk dan air yang berubah dengan cepat dari cair menjadi gel. Umumnya uji pergeseran mobilitas elektroforesis akan memiliki beberapa jalur untuk pengujian terpisah, yang digunakan untuk membandingkan campuran makromolekul yang berbeda. Satu jalur selalu ditetapkan sebagai kontrol dan biasanya hanya memiliki satu jenis makromolekul.

Sumber listrik harus dipilih dengan hati-hati dan tidak terhubung sampai semuanya siap. Jumlah waktu daya menyala menentukan pergeseran mobilitas makromolekul. Penting untuk memisahkan bagian-bagian yang cukup untuk analisis yang tepat. Jika daya tidak diatur waktunya dengan benar, perbandingan di masa mendatang juga akan menjadi tidak akurat. Arah makromolekul akan ditentukan oleh muatan apa yang mereka miliki secara alami — sebagian besar bergerak menuju ujung negatif.

Tes genetik sederhana dan analisis protein biasanya dilakukan dengan uji pergeseran mobilitas elektroforesis. Ini ditunjukkan oleh shift yang berbeda di jalur yang berbeda. Jika terjadi interaksi, makromolekul bergabung dan berjalan lebih lambat melalui matriks dibandingkan dengan jalur kontrol dengan hanya satu makromolekul. Tes pergeseran gel digunakan untuk menghilangkan atau mengkonfirmasi hasil genetik dengan cepat bahwa metode yang rumit bisa memakan waktu lebih lama untuk diselesaikan. Mereka juga dapat menentukan apakah antibodi, makromolekul sistem kekebalan, menempel pada protein yang dapat digunakan untuk melawan bakteri dan virus.