ELISA-proceduren börjar på kliniken, med ett blodprov som tas från patienten. Ett antal steg följs sedan med hjälp av ELISA-testkitet i laboratoriet. Testet kommer att upptäcka närvaron av antikroppar eller antigener mot en sjukdom, såsom HIV, i blodet. Stegen inkluderar tillsats av olika ämnen och tvättning och resultaten mäts i allmänhet genom en färgförändring.
Den enzymkopplade immunosorbentanalysen (ELISA), som också kallas enzymimmunoanalysen (EIA), används som ett diagnostiskt test. Det är mest känt som ett diagnostiskt test för HIV. Testplattan består vanligtvis av 96 små brunnar i vilka ett specifikt antigen är immobiliserat. Om antikroppen finns i serumprovet kommer den att binda till antigenet, vilket möjliggör detektering via de olika stegen i ELISA-proceduren.
Det första steget i ELISA-proceduren är att ta ett prov från patienten. Detta görs av en sjuksköterska, under sterila förhållanden. Blodet tas vanligtvis från en ven i armen eller handen. På armen läggs en stämpel för att svälla venen och göra proceduren lättare och huden rengörs där nålen ska stickas in. Ett litet stick kan kännas när nålen går in och blodet samlas i ett sterilt rör.
Efter att blodprovet tagits överförs det till labbet där resten av ELISA-proceduren kommer att utföras av en laboratorietekniker. Blodprovet tillsätts först till brunnarna på ELISA-plattan. Om den specifika antikroppen är närvarande binder den till antigenet. Plattan tvättas sedan med användning av en buffert för att avlägsna obundna antikroppar.
En andra antikropp, normalt av animaliskt ursprung, som har ett enzym som är fäst vid sig, tillsätts sedan, som kommer att binda till antikropp-antigenkomplexet. Plattan tvättas igen för att avlägsna överskott. Enzymet är färgreaktivt när ett substrat tillsätts i slutet av ELISA-proceduren. Det är mätningen av graden av färgförändring som ger resultatet.
ELISA-proceduren måste följas noggrant för att undvika falska resultat. I de flesta ELISA-plattor ingår en positiv och negativ kontroll, för att minimera sådana falska resultat. När man testar för hiv, kommer ett positivt resultat vanligtvis att följas upp av ett andra, bekräftande, test, ofta av en annan typ, såsom en Western Blot.