En western blot är en laboratorieanalysteknik som används för att isolera proteiner. Det kan användas vid diagnos av vissa sjukdomar, och även i forskning om olika proteiner och processer. Kända är western blotten kopplad till diagnosen HIV-infektion, men den kan också användas för att leta efter spår av bovin spongiform encefalit (BSE) och borrelia. Prover som skickas ut för testning med ett Western blot-protokoll kan ge resultat inom några dagar till flera veckor, beroende på labbkapaciteten och hur brådskande det är.
I en western-blot förs provet, som kan vara från blod eller vävnad, först genom elektrofores så att proteinerna separeras efter längd. En remsa av elektroforesgelen med isolerade proteiner av mållängden kan användas för att överföra proteinerna till ett nitrocellulosasubstrat för nästa steg av testet. Under detta skede introduceras en antikropp till provet, med målet att märka proteinerna med antigener som den antikroppen låser sig vid.
När proteinerna har märkts kan de lätt identifieras. När det gäller testning för sjukdom indikerar närvaron av ett reaktivt protein att provet har testat positivt. Western blottar ger sällan falska positiva resultat, även om det kan hända ibland, och de kan också returnera falska negativa resultat, där en person faktiskt har en sjukdom, men det syns inte vid Western blot-testning. Detta kan vara särskilt vanligt i de fall då det sjukdomsframkallande medlet ännu inte har börjat replikera.
Forskare kan använda resultaten för att identifiera specifika proteiner som de spårar, och för en mängd andra ändamål. Att förstå hur Western blot-protokollet fungerar är en viktig färdighet för vissa forskare och laboratorietekniker, eftersom de måste kunna returnera tillförlitliga och pålitliga resultat med denna metod. Labbfärdigheter inklusive att lära sig hur man hanterar komplicerade eller dåliga prover och hur man undviker kontaminering under processen så att resultaten av testet är kända för att vara sanna.
Denna teknik är ibland känd som en immunoblot, eftersom i huvudsak de önskade proteinerna ”blottas” med antikroppar så att de kommer att dyka upp. Detta test kan användas för att leta efter proteiner i alla djur, inte bara människor, med veterinärer som ofta använder Western blot-testet för att avgöra om en flock kor har blivit infekterad eller exponerad för BSE.