Vad är en IHC-antikropp?

En immunhistokemisk (IHC) antikropp är ett reagens som vanligtvis används i vetenskapliga studier för att märka antigener av intresse. Ett antigen är vilken liten molekyl som helst som kan orsaka en immunreaktion som tvingar fram antikroppsproduktion mot det enda antigenet. Baserat på däggdjurens immunsystem är antikroppsproduktion ett enda steg i en process för att identifiera material som främmande så att kroppen sedan kan attackera och driva ut det invasiva ämnet, oavsett om det är ett virus, en bakterieinfektion eller en liten molekyl som pollen.

Antikroppar kan ha en enorm specificitet och bindningsförmåga för att märka antigener. Den specificiteten utnyttjas till fördel för forskarna när antikroppsproduktion är inriktad på identifiering av specifika antigener av intresse. En tunn sektion av vävnad kan färgas med en antikropp så att försöksledaren enkelt kan identifiera alla antigenställen som finns i provet. Många företag är specialiserade på att skapa antikroppar, vilket gör att en stor kollektiv antikroppskatalog blir tillgänglig för forskare och experimenterande.

En IHC-antikropp används i olika experimentella tekniker. Antikroppsfärgning i tunna sektioner av vävnad inbäddade i paraffin eller plast används ofta så att antigener kan hittas in situ. En IHC-antikropp kan också användas i experimentella utfällningstekniker såsom en samimmunoutfällningsanalys, med fokus på att få ut antigener ur lösningen för att kvantifiera mängden antigen som finns i en stor bit vävnad. Analyser som mäter mängden ljus som kan passera genom en vävnadsodlingsplatta väl efter att en supernatant har exponerats för botten av en väl förbelagd IHC-antikropp används också ofta för att kvantifiera mängden av ett antigen i en homogeniserad vävnadsprov.

Det är möjligt att ha antikroppsfärgningsprotokoll som förlitar sig på användningen av en enda antikropp för antigendetektering. Dessa protokoll används vanligtvis på vävnadsprover som är inbäddade i ett icke-reaktivt substrat och monterade på en glasskiva. Dessa enkla antikroppsfärgningsprocedurer är också populära i laboratorier som märker sina egna antikroppar med detektionsmolekyler som fluoroforer.

Mer vanligt är dock att antikroppsfärgningsprotokoll kräver användning av primära och sekundära antikroppar. En primär IHC-antikropp framställs mot ett specifikt antigen, vilket kan vara ovanligt studerat. En sekundär IHC-antikropp kommer att framkallas mot den primära IHC-antikroppen. Den sekundära antikroppen kommer dock att märkas till en identifierande molekyl såsom biotin eller en fluorofor. Denna teknik med två antikroppar är vanlig eftersom företag sparar pengar genom att lägga till fluoroforer eller dyra märkningsreagenser till stora mängder antikroppar som produceras mot immunmarkörerna hos en viss art snarare än att märka dyra reagens till en antikropp som tagits fram mot ett antigen som kan studeras av väldigt få forskare.