En fluoresceinisotiocyanatkonjugerad (FITC) antikropp är en fluorescerande molekylär markör som är mycket specifik för antingen ett visst protein eller en primär antikropp. De används för att identifiera proteiner i immuncytokemi, enzym- och proteinaktivitetsanalyser, flödescytometri och Western blotting. De flesta FITC-antikroppar kan köpas genom specialiserade molekylärbiologiska företag eller tillverkas av individuella forskningslabb.
FITC är en fluorokrom som ofta är konjugerad eller kopplad till en antikropp för att göra en specifik, fluorescerande markör. När de utsätts för elektromagnetisk energi vid en specifik våglängd är fluorokromer kemikalier som absorberar energin och avger en foton vid en specifik våglängd. FITC absorberar energi vid 495 nm och sänder ut en foton vid 521 nm. Varje fluorokrom har olika absorptions- och emissionsintervall, vilket möjliggör systematisk detektering av många fluorkromkopplade antikroppar i en bit vävnad eller prov. Detta liknar att märka olika delar av en cell med olika färger och sedan använda specialglasögon för att titta på bara en färg åt gången.
Antikroppar kan kopplas, eller konjugeras, till FITC-molekylen för att producera en FITC-antikropp. Denna FITC-antikropp kan användas för att direkt eller indirekt märka ett protein. När en FITC-antikropp direkt märker ett protein, fungerar den som den primära antikroppen, eller en antikropp i direkt kontakt med antigenet. Indirekt användning av en FITC-antikropp sker när den används som en sekundär antikropp, binder specifikt till en primär antikropp. När en FITC-konjugerad antikropp används direkt tar märkningsproceduren kortare tid, men märkningen är inte lika stark. Indirekt märkning tar ett extra steg, men signalen eller märkningen förstärks eftersom flera FITC-märkta sekundära antikroppar kan fästa till en enda primär antikropp.
Det finns många användningsområden för FITC-antikroppen inom cell- och molekylärbiologi. Denna typ av antikropp kan användas ensam eller i kombination med andra monoklonala eller polyklonala antikroppar för att märka specifika proteiner i celler i en teknik som kallas immuncytokemi. FITC-antikroppar kan också användas i sådana tekniker som enzym- och proteinaktivitetsanalyser, flödescytometri och Western blotting.
FITC-konjugerade primära och sekundära antikroppar är allmänt tillgängliga genom många molekylärbiologiska företag. Det är också möjligt för laboratorier att förbereda sina egna primära antikroppar och sedan använda ett kit för att konjugera FITC till dem. Vissa företag kommer att ta labbförberedda primära antikroppar och konjugera dem till FITC-fluorokrom för ett labb. FITC-konjugerade sekundära antikroppar tillverkas vanligtvis inte av enskilda forskningslabb, utan köps vanligtvis från företag som specialiserar sig på produktion av sekundära antikroppar.