En enzymkopplad immunosorbentanalys (ELISA) är ett vanligt test som används inom immunologi för att detektera antigener eller antikroppar. Antigener framkallar en reaktion i immunsystemet – med andra ord orsakar de sjukdomar. ELISA används för att upptäcka många bakteriella och virala antigener, inklusive humant immunbristvirus (HIV), malaria, kolera, mässling och påssjuka. Ett något annorlunda ELISA-protokoll kan användas för att detektera antikroppar mot dessa och många andra patogener. Ett ELISA-protokoll är steg-för-steg-proceduren för att utföra en specifik ELISA.
Även om ELISA-protokollet varierar något, beroende på vilken typ av ELISA som utförs, är grundkonceptet detsamma för dem alla. ELISA beror på enzymkopplade antikroppar, även kallade antiglobuliner. En signalmolekyl fäst vid dessa antiglobuliner gör att ett substrat som tillsätts under analysen ändrar färg, om det önskade antigenet eller antikroppen är närvarande. Mängden antigen eller antikropp som finns är proportionell mot mängden färgförändring, som kan mätas med en elektronisk plattläsare.
Det finns tre huvudtyper av ELISA. En direkt ELISA används vanligtvis för att detektera antigener snarare än antikroppar. Detta är det enklaste ELISA-protokollet, eftersom den enzymkopplade antikroppen binder direkt till det önskade antigenet. Substrat tillsätts sedan för att bestämma mängden närvarande antigen.
En indirekt ELISA används för att detektera antikroppar, medan en annan typ av indirekt ELISA – kallad sandwich ELISA – kan användas för att detektera antigener. Ett sandwich-ELISA-protokoll kräver två antikroppar, kallade infångnings- och detektionsantikroppar, för att binda till det önskade antigenet. Ett antiglobulin tillsätts, som binder till detektionsantikroppen, och substratet tillsätts. Den indirekta ELISA följer ett liknande protokoll, men använder ett infångningsantigen snarare än en infångningsantikropp för att detektera den önskade antikroppen.
Kompetitiv ELISA används ofta för att detektera antigener som finns i låga koncentrationer, eftersom det är en mycket känslig analys. Till skillnad från de andra ELISA-protokollen använder kompetitiv ELISA ett enzymkopplat antigen istället för en antikropp, och en något annorlunda kvantifieringsmetod. I den läggs provet som innehåller antigenet som ska detekteras och det enzymkopplade antigenet båda till en antikropp, och de två antigenerna tävlar om antikroppsbindningsställen. När substratet tillsätts är färgförändringen större, med ett högre förhållande mellan bundna enzymkopplade antigener och bundna provantigener. Detta innebär att högre färgförändring detekteras vid lägre koncentrationer av provantigenet, vilket är det som gör denna metod så känslig.