ELISA-metoden är ett test som används inom immunologi och andra vetenskapliga områden för att detektera antikroppar och antigener. ELISA står för enzym-linked immunosorbent assay, vilket syftar på att antikroppar kopplade till enzymer används för att bestämma resultaten av testet. ELISA-metoden används inom medicin för att upptäcka antikroppar mot sjukdomar som en diagnostisk åtgärd, och är en vanlig teknik som används inom immunologisk och biokemisk forskning.
ELISA-testet utvecklades på 1960- och 1970-talen som en ersättning för immunologiska tester som involverade användning av radioaktiva antikroppar och antigener. Riskerna med att använda radioaktiva material gjorde testprocessen besvärlig osäker, och tillkomsten av ELISA-metoden löste båda dessa problem. Istället för att använda radioaktiva material för att bestämma resultaten av ett test, använder ELISA enzymer som reagerar med antikroppar för att bilda färgade produkter. Utvecklingen av färg i ett ELISA-test indikerar ett positivt resultat.
Det finns flera olika typer av ELISA-tester. Den vanligaste ELISA-metoden kallas indirekt ELISA; detta är ett antikroppstest som används för att avgöra om en viss typ av antikropp finns i ett prov och i vilken koncentration. Inom diagnostisk medicin används detta test för att upptäcka förekomsten av antikroppar mot infektionssjukdomar som HIV, hepatit och andra. Närvaron av antikroppar mot dessa sjukdomar indikerar att individen som testas har exponerats för smittämnena. Typiskt är provet som används av en patients blod.
I detta test används ett specifikt antigenprotein för att belägga en mikrotiterplatta. Denna lilla plastplatta innehåller 96 små brunnar och ett enda ELISA-test kan utföras i varje brunn. Antigenet som används för ett givet test beror på vilken typ av antikropp testet försöker detektera. Till exempel, om ELISA används för ett HIV-test, skulle antigenet som används vara specifikt för detta virus.
När testet fortskrider tillsätts små mängder av det okända provet till varje brunn på mikrotiterplattan, och plattan inkuberas för att ge antikroppar i provet tid att binda till antigenet. Därefter tillsätts en sekundär detektionsantikropp till varje brunn på plattan. Om provet innehåller någon av den antikroppstyp som testas för, kommer det att binda till den sekundära detektionsantikroppen under den efterföljande inkubationsperioden.
Nyckeln till ELISA-metoden är att den sekundära antikroppen är märkt med en speciell sorts enzym. Enzymet som används kan ändra färgen på testprovet när det reagerar med sitt substrat. Därför, om ett prov innehåller någon av antikroppen som testas för, kommer tillsättning av substratet till en brunn att få det att ändra färg, på grund av närvaron av den sekundära antikroppen och dess associerade enzym.
Det finns andra varianter av ELISA-metoden, inklusive ett test som kallas sandwich-ELISA. Detta används för att detektera antigener i ett prov, snarare än antikroppar. I detta test är mikrotiterplattan belagd med ett standardiserat prov av antikropp. Därefter tillsätts antigentestprovet, följt av tillsatsen av den sekundära detektionsantikroppen och dess associerade enzym. Liksom med den indirekta ELISA, indikerar bildandet av en färgad produkt ett positivt resultat.