Standar internal adalah jumlah bahan kimia yang diketahui ditambahkan ke sampel analitik, yang memungkinkan teknisi mengkalibrasi instrumen laboratorium. Ini juga memungkinkan penghitungan jumlah bahan kimia yang tidak diketahui, karena instrumen akan menunjukkan jumlah standar yang diketahui sebagai referensi. Pengujian yang dapat memperoleh manfaat dari standar internal termasuk kromatografi gas dan cair.
Kromatografi gas melewatkan sampel yang diuapkan melalui kolom yang diisi dengan bentuk tanah yang padat dan sangat murni. Sampel dipindahkan melalui kolom dengan gas inert, atau non-reaktif, seperti nitrogen atau argon. Molekul yang berbeda menyerap pada kolom dan kemudian dilepaskan berdasarkan struktur molekulnya. Gas kemudian membawa sampel yang terpisah ke nyala api untuk membuat ion, atau molekul dengan muatan listrik kecil. Detektor menentukan jumlah setiap ion dan memplot hasilnya pada grafik.
Kromatografi cair juga memisahkan sampel menjadi molekul yang berbeda, tetapi menggunakan pelarut cair untuk memindahkan sampel dengan gravitasi atau tekanan melintasi bahan stasioner. Bahan dasar kromatografi dapat berupa resin, tanah diatom, atau bahkan cairan lain. Sampel dimuat di bagian atas, dan pelarut ditambahkan untuk mendorong sampel ke bawah melalui bahan kolom.
Bagian dari sampel akan melewati kolom dengan kecepatan yang berbeda berdasarkan karakteristik molekuler atau ionik. Sampel kecil cairan, yang disebut alikuot, diambil secara berkala dari bagian bawah kolom. Sampel-sampel ini akan berisi molekul-molekul berbeda yang telah terpisah dalam kolom, dan dianalisis untuk menentukan komposisinya.
Dalam kedua jenis kromatografi, banyak variabel dapat mempengaruhi hasil. Laju aliran gas pembawa dapat berubah sedikit, atau kolom mungkin berada pada suhu yang berbeda untuk sampel yang berbeda. Menambahkan standar internal yang dikalibrasi memberikan hasil yang diketahui untuk setiap sampel yang ditempatkan di instrumen uji. Jika beberapa variabel dalam instrumen, seperti laju aliran gas, berubah dengan persentase kecil, standar akan berubah dengan jumlah yang sama.
Setelah instrumen dikalibrasi dengan menjalankan sampel dengan standar internal, sampel kimia yang tidak diketahui dapat dijalankan melalui instrumen yang sama, dengan standar yang disertakan. Hasilnya akan menunjukkan susunan kimiawi yang tidak diketahui, ditambah standar internal, yang diplot pada grafik yang dibuat oleh instrumen. Mengetahui jumlah standar internal, jumlah relatif bahan kimia yang tidak diketahui dapat ditentukan, yang akan memungkinkan perhitungan konsentrasi.
Penting untuk dicatat bahwa standar internal tidak digunakan untuk bereaksi secara kimia dengan sampel apa pun. Sebaliknya, ini digunakan untuk membandingkan molekul dari bahan yang tidak diketahui dengan jumlah standar yang diketahui. Teknik ini dikenal sebagai pengaturan satu variabel, karena standar yang diketahui akan selalu tetap sama dari sampel ke sampel, terlepas dari kondisi lain yang mungkin berubah.