Enzym-linked immunosorbent assay (ELISA) adalah tes umum yang digunakan dalam imunologi untuk mendeteksi antigen atau antibodi. Antigen memprovokasi reaksi sistem kekebalan – dengan kata lain, mereka menyebabkan penyakit. ELISA digunakan untuk mendeteksi banyak antigen bakteri dan virus, termasuk human immunodeficiency virus (HIV), malaria, kolera, campak, dan gondok. Protokol ELISA yang sedikit berbeda dapat digunakan untuk mendeteksi antibodi terhadap patogen ini dan banyak patogen lainnya. Protokol ELISA adalah prosedur langkah demi langkah untuk melakukan ELISA tertentu.
Meskipun protokol ELISA sedikit berbeda, tergantung pada jenis ELISA yang dilakukan, konsep dasarnya sama untuk semuanya. ELISA tergantung pada antibodi terkait-enzim, juga disebut antiglobulin. Molekul sinyal yang melekat pada antiglobulin ini menyebabkan substrat yang ditambahkan selama pengujian berubah warna, jika antigen atau antibodi yang diinginkan ada. Jumlah antigen atau antibodi yang ada sebanding dengan jumlah perubahan warna, yang dapat diukur dengan pembaca pelat elektronik.
Ada tiga jenis utama ELISA. ELISA langsung biasanya digunakan untuk mendeteksi antigen daripada antibodi. Ini adalah protokol ELISA yang paling sederhana, karena antibodi terkait-enzim mengikat langsung ke antigen yang diinginkan. Substrat kemudian ditambahkan untuk menentukan jumlah antigen yang ada.
ELISA tidak langsung digunakan untuk mendeteksi antibodi, sedangkan jenis ELISA tidak langsung lainnya — disebut ELISA sandwich — dapat digunakan untuk mendeteksi antigen. Protokol sandwich ELISA membutuhkan dua antibodi, yang disebut antibodi penangkap dan deteksi, untuk mengikat antigen yang diinginkan. Antiglobulin ditambahkan, yang mengikat antibodi deteksi, dan substrat ditambahkan. ELISA tidak langsung mengikuti protokol serupa, tetapi menggunakan antigen penangkap daripada antibodi penangkap untuk mendeteksi antibodi yang diinginkan.
ELISA kompetitif sering digunakan untuk mendeteksi antigen yang ada dalam konsentrasi rendah, karena merupakan uji yang sangat sensitif. Berbeda dengan protokol ELISA lainnya, ELISA kompetitif menggunakan antigen terkait-enzim alih-alih antibodi, dan metode kuantifikasi yang sedikit berbeda. Di dalamnya, sampel yang mengandung antigen yang akan dideteksi dan antigen terkait-enzim keduanya ditambahkan ke antibodi, dan kedua antigen bersaing untuk tempat pengikatan antibodi. Ketika substrat ditambahkan, perubahan warna lebih besar, dengan rasio yang lebih tinggi dari antigen terikat enzim terhadap antigen sampel terikat. Ini berarti bahwa perubahan warna yang lebih tinggi terdeteksi pada konsentrasi antigen sampel yang lebih rendah, yang membuat metode ini sangat sensitif.