Prosedur ELISA adalah prosedur yang digunakan untuk melakukan enzim-linked immunosorbent array (ELISA), tes yang dapat digunakan untuk mengidentifikasi keberadaan protein tertentu dan untuk menentukan konsentrasinya. Sebenarnya ada sejumlah prosedur berbeda yang dapat digunakan untuk tes ELISA, termasuk prosedur langsung, tidak langsung, dan yang disebut “sandwich”. Dalam semua kasus, prosedur ELISA dilakukan di laboratorium dalam kondisi yang terkendali untuk meminimalkan risiko hasil yang salah.
Untuk melakukan tes ELISA, perlu memiliki sampel seperti darah. Alasan umum untuk melakukan ELISA adalah untuk menguji paparan agen infeksi, dalam hal sampel tersebut mungkin atau mungkin tidak memiliki protein tertentu, dan tes dilakukan untuk mencari protein itu. Tes ini juga dapat digunakan untuk memeriksa konsentrasi protein.
Untuk melakukan pengujian, alat yang disebut pelat mikrotiter sering digunakan. Penggemar drama medis dan kriminal mungkin akrab dengan pelat mikrotiter; mereka terlihat seperti nampan kecil dengan sejumlah sisipan, yang masing-masing berisi botol. Dalam prosedur ELISA sandwich, teknisi memulai dengan melapisi vial dengan antigen yang diketahui dalam konsentrasi yang diketahui, dan kemudian mencucinya dengan larutan buffer. Selanjutnya, serum yang dibuat dari sampel pasien yang dicuci dalam larutan buffer yang sama ditambahkan.
Jika pasien memiliki antibodi terhadap antigen yang sudah ada di tabung, mereka akan menempel di sisi tabung. Langkah selanjutnya dalam prosedur ELISA melibatkan pengenalan antigen yang sama, ditandai dengan enzim, ke tabung. Antigen mengunci antibodi yang menempel di sisi tabung. Enzim berpendar atau berubah warna, memungkinkan teknisi untuk melihat bahwa serum memiliki antibodi yang mengunci antigen, dan untuk menentukan konsentrasi, berdasarkan intensitas reaksi enzim.
Prosedur ELISA sangat sensitif dan sangat tepat, dengan teknisi menggunakan antigen yang sangat spesifik untuk memastikan bahwa mereka mengidentifikasi antibodi yang tepat, atau sebaliknya, tergantung pada jenis tes yang dilakukan. Namun, positif palsu memang terjadi. Dalam contoh positif palsu, tes ELISA biasanya digunakan untuk memeriksa tanda-tanda pajanan HIV, dan kadang-kadang menghasilkan positif palsu karena solusinya dapat mengikat protein yang terkait dengan HIV yang dimiliki beberapa orang tanpa terinfeksi. Inilah sebabnya mengapa positif harus dikonfirmasi dengan Western Blot.