Pengujian pirogen mendefinisikan proses yang digunakan oleh produsen obat untuk menentukan apakah racun bakteri ada dalam vaksin dan obat-obatan yang dapat menyebabkan demam bila digunakan pada manusia. Ini menentukan apakah mikroba atau metabolitnya ada dalam larutan intravena selama proses pembuatan. Bentuk pengujian pirogen yang paling umum dan tertua terdiri dari menyuntikkan obat ke kelinci untuk menentukan apakah demam berkembang. Tes yang lebih baru menggunakan darah dari kepiting tapal kuda untuk menguji racun.
Metode pengujian pirogen kelinci muncul pada tahun 1940-an setelah beberapa pasien jatuh sakit karena obat-obatan intravena. Perangkat hipodermik pada saat itu terbukti berguna untuk memberikan obat langsung ke dalam aliran darah untuk pasien yang tidak dapat mentoleransi obat oral. Meski alat suntik steril, obat itu tidak selalu aman.
Pasien terkadang mengalami demam tinggi, kedinginan, dan nyeri tubuh, dan beberapa orang mengalami syok. Dokter tidak tahu mengapa ini terjadi, sering menyebut kondisi demam injeksi, demam saline, atau demam air suling. Para peneliti kemudian menemukan beberapa obat dan vaksin terkontaminasi di laboratorium produksi dengan pirogen endotoksin, bakteri kuat yang tahan terhadap sterilisasi.
Tubuh manusia melawan paparan racun bakteri di lingkungan melalui kulit. Ketika obat yang terkontaminasi disuntikkan ke dalam aliran darah, racun melewati mekanisme pertahanan normal. Sel darah putih mulai melepaskan bentuk lain dari pirogen yang menyebabkan demam tinggi, yang dapat menyebabkan syok dan kematian.
Pengujian pirogen di laboratorium obat melibatkan peralatan pemanas yang digunakan untuk memastikan sterilisasi. Obat disuntikkan ke pembuluh darah telinga kelinci untuk melihat apakah demam berkembang. Suhu rektal hewan uji dianalisis setelah 30 menit dan sekali lagi satu hingga tiga jam kemudian. Jika hewan tetap bebas demam, solusinya bebas dari racun.
Proses pengujian pirogen pada hewan biasanya melibatkan penyuntikan beberapa kelinci sekaligus dalam jangka waktu 10 menit. Dosis untuk setiap kelinci tergantung pada berat badan, usia, dan jenis kelamin. Kelompok kelinci yang sama mungkin diuji berulang kali setiap beberapa hari sampai mereka mengembangkan toleransi terhadap obat-obatan.
Teknik pengujian pirogen yang lebih baru disebut uji limulus amoebocyte lysate (LAL). Darah dari kepiting tapal kuda mengandung racun tingkat tinggi yang secara alami ditemukan dalam kehidupan laut. Para ilmuwan menemukan cara untuk menggunakan darah untuk menguji toksin bakteri dalam obat-obatan dan bahan baku yang digunakan untuk memproduksi obat. Prosedur pengujian pirogen LAL mungkin 100 kali lebih sensitif daripada metode pengujian kelinci. Perangkat medis yang ditanamkan ke manusia melalui pengujian LAL, bersama dengan obat-obatan radioaktif dan anestesi.