Metode ELISA adalah tes yang digunakan dalam imunologi dan bidang ilmiah lainnya untuk mendeteksi antibodi dan antigen. ELISA adalah singkatan dari enzyme-linked immunosorbent assay, yang mengacu pada fakta bahwa antibodi yang digabungkan dengan enzim digunakan untuk menentukan hasil tes. Metode ELISA digunakan dalam pengobatan untuk mendeteksi antibodi terhadap penyakit sebagai ukuran diagnostik, dan merupakan teknik umum yang digunakan dalam penelitian imunologi dan biokimia.
Tes ELISA dikembangkan pada 1960-an dan 1970-an sebagai pengganti tes imunologi yang melibatkan penggunaan antibodi dan antigen radioaktif. Risiko penggunaan bahan radioaktif membuat proses pengujian menjadi tidak aman, dan munculnya metode ELISA memecahkan kedua masalah ini. Alih-alih menggunakan bahan radioaktif untuk menentukan hasil tes, ELISA menggunakan enzim yang bereaksi dengan antibodi untuk membentuk produk berwarna. Perkembangan warna pada uji ELISA menunjukkan hasil yang positif.
Ada beberapa jenis tes ELISA. Metode ELISA yang paling umum digunakan disebut ELISA tidak langsung; ini adalah tes antibodi yang digunakan untuk menentukan apakah jenis antibodi tertentu ada dalam sampel, dan pada konsentrasi apa. Dalam kedokteran diagnostik, tes ini digunakan untuk mendeteksi adanya antibodi terhadap penyakit menular seperti HIV, hepatitis, dan lain-lain. Kehadiran antibodi terhadap penyakit ini menunjukkan bahwa individu yang diuji telah terpapar agen infeksi. Biasanya, sampel yang digunakan adalah darah pasien.
Dalam tes ini, protein antigen spesifik digunakan untuk melapisi pelat mikrotiter. Pelat plastik kecil ini berisi 96 sumur kecil, dan satu tes ELISA dapat dilakukan di setiap sumur. Antigen yang digunakan untuk tes tertentu bergantung pada jenis antibodi yang coba dideteksi oleh tes tersebut. Misalnya, jika ELISA digunakan untuk tes HIV, antigen yang digunakan akan spesifik untuk virus ini.
Saat pengujian berlangsung, sejumlah kecil sampel yang tidak diketahui ditambahkan ke setiap lubang pelat mikrotiter, dan pelat diinkubasi untuk memberikan waktu bagi antibodi dalam sampel untuk mengikat antigen. Selanjutnya, antibodi deteksi sekunder ditambahkan ke setiap lubang pelat. Jika sampel mengandung salah satu jenis antibodi yang sedang diuji, sampel tersebut akan berikatan dengan antibodi deteksi sekunder selama periode inkubasi berikutnya.
Kunci metode ELISA adalah antibodi sekunder diberi label dengan jenis enzim tertentu. Enzim yang digunakan mampu mengubah warna sampel uji ketika bereaksi dengan substratnya. Oleh karena itu, jika sampel mengandung antibodi yang sedang diuji, penambahan substrat ke sumur akan menyebabkannya berubah warna, karena adanya antibodi sekunder dan enzim yang terkait.
Ada variasi lain pada metode ELISA, termasuk tes yang disebut sandwich ELISA. Ini digunakan untuk mendeteksi antigen dalam sampel, bukan antibodi. Dalam tes ini, pelat mikrotiter dilapisi dengan sampel antibodi standar. Selanjutnya, sampel uji antigen ditambahkan, diikuti dengan penambahan antibodi pendeteksi sekunder dan enzim terkaitnya. Seperti halnya ELISA tidak langsung, pembentukan produk berwarna menunjukkan hasil yang positif.