Antibodi imunohistokimia (IHC) adalah reagen yang biasa digunakan dalam studi ilmiah untuk menandai antigen yang diinginkan. Antigen adalah molekul kecil apa pun yang dapat menyebabkan reaksi imun yang memaksa produksi antibodi melawan antigen tunggal tersebut. Berdasarkan sistem kekebalan mamalia, produksi antibodi merupakan satu langkah dalam proses mengidentifikasi bahan sebagai benda asing sehingga tubuh kemudian dapat menyerang dan mengeluarkan zat invasif, baik itu virus, infeksi bakteri, atau molekul kecil seperti serbuk sari.
Antibodi dapat memiliki spesifisitas dan kemampuan mengikat yang luar biasa dalam menandai antigen. Kekhususan itu dimanfaatkan untuk keuntungan para ilmuwan ketika produksi antibodi diarahkan pada identifikasi antigen tertentu yang diminati. Bagian tipis jaringan dapat diwarnai dengan antibodi sehingga peneliti dapat dengan mudah mengidentifikasi semua situs antigen yang ada dalam sampel tersebut. Banyak perusahaan mengkhususkan diri dalam pembuatan antibodi, menyebabkan katalog antibodi kolektif yang luas tersedia bagi para ilmuwan dan peneliti.
Antibodi IHC digunakan dalam berbagai teknik eksperimental. Pewarnaan antibodi pada bagian tipis jaringan yang tertanam dalam parafin atau plastik sering digunakan agar antigen dapat ditemukan secara in situ. Antibodi IHC juga dapat digunakan dalam teknik presipitasi eksperimental seperti uji ko-imunopresipitasi, yang berfokus pada membawa antigen keluar dari larutan untuk mengukur jumlah antigen yang ada dalam sepotong besar jaringan. Pengujian yang mengukur jumlah cahaya yang mampu melewati pelat kultur jaringan setelah supernatan terpapar ke dasar antibodi IHC yang telah dilapisi dengan baik juga sering digunakan untuk mengukur jumlah antigen dalam sampel yang dihomogenisasi. sampel jaringan.
Dimungkinkan untuk memiliki protokol pewarnaan antibodi yang mengandalkan penggunaan antibodi tunggal untuk deteksi antigen. Protokol ini biasanya digunakan pada sampel jaringan yang tertanam dalam substrat non-reaktif dan dipasang pada slide kaca. Prosedur pewarnaan antibodi tunggal ini juga populer di laboratorium yang menandai antibodi mereka sendiri dengan molekul pendeteksi seperti fluorofor.
Lebih umum, bagaimanapun, protokol pewarnaan antibodi memerlukan penggunaan antibodi primer dan sekunder. Antibodi IHC primer dibangkitkan terhadap antigen spesifik, yang mungkin jarang dipelajari. Antibodi IHC sekunder akan dibangkitkan terhadap antibodi IHC primer. Antibodi sekunder akan ditandai, bagaimanapun, ke molekul pengidentifikasi seperti biotin atau fluorofor. Teknik dua antibodi ini umum karena perusahaan menghemat uang dengan menambahkan fluorofor atau reagen penandaan yang mahal ke sejumlah besar antibodi yang dibangkitkan terhadap penanda kekebalan spesies tertentu daripada menandai reagen mahal ke antibodi yang dibangkitkan terhadap antigen yang mungkin dipelajari oleh sangat sedikit. ilmuwan.