Antibodi fluorescein isothiocyanate-conjugated (FITC) adalah penanda molekuler fluoresen yang sangat spesifik untuk protein tertentu atau antibodi primer. Mereka digunakan untuk mengidentifikasi protein dalam imunositokimia, uji aktivitas enzim dan protein, flow cytometry, dan Western blotting. Sebagian besar antibodi FITC dapat dibeli melalui perusahaan biologi molekuler khusus atau dibuat oleh laboratorium penelitian individu.
FITC adalah fluorokrom yang sering terkonjugasi atau dikaitkan dengan antibodi untuk membuat penanda fluoresen yang spesifik. Ketika terkena energi elektromagnetik pada panjang gelombang tertentu, fluorokrom adalah bahan kimia yang akan menyerap energi dan memancarkan foton pada panjang gelombang tertentu. FITC menyerap energi pada 495 nm dan memancarkan foton pada 521 nm. Setiap fluorokrom memiliki rentang penyerapan dan emisi yang berbeda, memungkinkan pendeteksian sistematis banyak antibodi terkait fluorkrom dalam satu bagian jaringan atau sampel. Ini mirip dengan memberi label bagian yang berbeda dari sel dengan warna yang berbeda dan kemudian menggunakan kacamata khusus untuk melihat hanya satu warna pada satu waktu.
Antibodi dapat dihubungkan, atau terkonjugasi, ke molekul FITC untuk menghasilkan antibodi FITC. Antibodi FITC ini dapat digunakan untuk secara langsung atau tidak langsung melabeli protein. Ketika antibodi FITC secara langsung memberi label pada protein, ia bertindak sebagai antibodi primer, atau antibodi yang bersentuhan langsung dengan antigen. Penggunaan antibodi FITC secara tidak langsung terjadi ketika antibodi tersebut digunakan sebagai antibodi sekunder, yang secara khusus mengikat antibodi primer. Ketika antibodi terkonjugasi FITC digunakan secara langsung, prosedur pelabelan membutuhkan waktu lebih sedikit, tetapi pelabelan tidak sekuat itu. Pelabelan tidak langsung membutuhkan langkah ekstra, tetapi sinyal atau label diperkuat karena beberapa antibodi sekunder bertanda FITC dapat menempel pada satu antibodi primer.
Ada banyak kegunaan antibodi FITC dalam biologi sel dan molekuler. Jenis antibodi ini dapat digunakan sendiri atau dalam kombinasi dengan antibodi monoklonal atau poliklonal lain untuk memberi label pada protein tertentu di dalam sel dalam teknik yang dikenal sebagai imunositokimia. Antibodi FITC juga dapat digunakan dalam teknik seperti uji aktivitas enzim dan protein, flow cytometry, dan Western blotting.
Antibodi primer dan sekunder terkonjugasi FITC tersedia secara luas melalui banyak perusahaan biologi molekuler. Hal ini juga memungkinkan bagi laboratorium untuk menyiapkan antibodi primer mereka sendiri dan kemudian menggunakan kit untuk mengkonjugasikan FITC dengan mereka. Beberapa perusahaan akan mengambil antibodi primer yang disiapkan laboratorium dan mengkonjugasikannya ke FITC fluorochrome untuk laboratorium. Antibodi sekunder terkonjugasi FITC biasanya tidak dibuat oleh laboratorium penelitian individu, dan biasanya dibeli dari perusahaan yang mengkhususkan diri dalam produksi antibodi sekunder.