Ada empat bahasa utama yang digunakan oleh orang-orang pada zaman Alkitab: Latin, Yunani, Aram, dan Ibrani. Perjanjian Lama dari Alkitab awalnya ditulis dalam bahasa Aram dan Ibrani, dan Perjanjian Baru ditulis dalam bahasa Yunani. Campuran bahasa ini mencerminkan asal usul berbagai orang yang berkontribusi pada Alkitab, karena bahasa lisan dan tulisan bervariasi menurut etnis, kelas, dan pendidikan. Tiga dari empat bahasa dianggap bahasa mati, artinya tidak diucapkan lagi meskipun para sarjana terus membaca dan mempelajarinya. Yang keempat, bahasa Ibrani, masih digunakan di beberapa bagian Timur Tengah dan dalam Kitab Taurat, Alkitab Yahudi.
Bahasa Aram mungkin adalah bahasa yang paling tidak dikenal pada zaman Alkitab. Istilah ini sebenarnya mengacu pada keluarga bahasa Semit kuno yang digunakan secara luas di seluruh Timur Tengah. Aram terkait erat dengan bahasa Ibrani, yang meminjam skrip untuk alfabetnya. Bahasa Aram Alkitab tidak lagi digunakan, meskipun bahasa modern dalam keluarga digunakan di berbagai belahan dunia untuk liturgi, praktik keagamaan, dan komunikasi di beberapa daerah. Bahasa itu adalah bahasa umum di Palestina, dan kemungkinan besar adalah bahasa yang digunakan Yesus sendiri. Di Timur Tengah diganti dengan bahasa Arab pada abad ketujuh.
Bahasa Yunani yang digunakan pada zaman Alkitab adalah Bahasa Yunani Umum, yang terkait dengan Bahasa Yunani Modern, meskipun cukup berbeda sehingga penutur bahasa Yunani Modern tidak dapat memahaminya. Bahasa Yunani umum adalah dialek yang lebih mendasar daripada bahasa Yunani Kuno yang digunakan oleh Aristoteles dan Plato. Meskipun bahasa Yunani Alkitab tidak lagi digunakan, beberapa sarjana masih membaca Perjanjian Baru dalam bahasa ini. Banyak penutur dan cendekiawan Yunani tinggal di bagian timur kekaisaran Romawi, dan menyumbangkan bahasa dan budaya ke wilayah tersebut.
Bahasa Latin dituturkan oleh para sarjana dan administrator. Itu adalah bahasa resmi Kekaisaran Romawi, dan dokumen, dekrit, dan pengumuman akan ditawarkan dalam bahasa ini. Tidak mungkin bahwa bahasa Latin digunakan secara luas di antara warga biasa, meskipun orang-orang yang lebih berpendidikan mungkin telah menggunakannya. Bahasa Latin tidak diadopsi untuk liturgi keagamaan sampai abad kedua, ketika bahasa itu menggantikan bahasa Yunani di seluruh Kekaisaran. Ini adalah induk dari Bahasa Roman, termasuk Italia, Prancis, Portugis, dan Spanyol.
Beberapa orang berbicara bahasa Ibrani pada zaman Alkitab karena sebagian besar telah digantikan oleh bahasa Aram, tetapi kebanyakan orang Yahudi membaca Alkitab dalam bahasa Ibrani. Kebangkitan pada tahun 1800-an menghidupkan kembali bahasa Ibrani Alkitabiah, melestarikannya sebagai bahasa yang hidup, meskipun digunakan oleh sejumlah orang terbatas.
Keempat bahasa utama ini mewakili berbagai budaya dan etnis, yang semuanya menonjol dalam Alkitab. Sarjana Alkitab sering mempelajari dua atau lebih bahasa ini dalam upaya untuk mendapatkan pemahaman yang lebih dalam tentang Alkitab dan orang-orang yang menghuni halaman-halamannya.