Spektrofotometer fluoresensi, juga dikenal sebagai fluorimeter, adalah instrumen ilmiah yang digunakan dalam spektroskopi fluoresensi untuk menentukan spektrum fluoresensi sampel. Spektrum ini kemudian dianalisis untuk memberikan atau mengkonfirmasi identifikasi komposisi sampel. Sebuah spektrofotometer fluoresensi sering dapat ditemukan di laboratorium kimia, biokimia, dan medis untuk membantu dalam analisis senyawa organik.
Spektroskopi fluoresensi adalah studi tentang fluoresensi sampel. Ketika senyawa tertentu dilewatkan melalui cahaya, sinar ultraviolet (UV) dalam hal ini, mereka memancarkan radiasi tingkat rendah, sering terungkap sebagai cahaya tampak. Fluoresensi yang dihasilkan mengandung panjang gelombang yang bervariasi dan, dengan demikian, melihat spektrum emisi dan eksitasinya dapat digunakan untuk membantu mengidentifikasi unsur-unsur dalam senyawa.
Spektrofotometer fluoresensi secara tradisional mengandung monokromator dengan kisi difraksi atau filter yang bertindak sebagai kisi difraksi. Monokromator adalah instrumen ilmiah yang memungkinkan pengguna untuk memilih panjang gelombang cahaya tertentu menggunakan kisi difraksi. Setelah panjang gelombang eksitasi dipilih, ia difokuskan ke sampel, menarik molekul di dalamnya untuk berpendar. Sebuah detektor ditempatkan pada sudut 90° dari cahaya eksitasi agar tidak mencemari hasil dengan cahaya eksitasi. Hasilnya adalah spektrum emisi.
Banyak jenis spektrofotometer fluoresensi dapat merekam spektrum fluoresensi dan spektrum eksitasi. Spektrum eksitasi adalah hasil dari menahan panjang gelombang emisi pada nilai tertentu, bukan panjang gelombang eksitasi konstan. Spektrum ini kemudian melewati banyak panjang gelombang yang berbeda dan hasilnya dicatat untuk analisis selanjutnya. Intensitas fluoresensi sebanding dengan penyerapan cahaya ke dalam sampel, yang membuat kedua jenis spektrum identik.
Salah satu contoh penggunaan spektrofotometer fluoresensi adalah untuk mempelajari komposisi fluoresensi kalajengking saat berada di bawah sinar UV. Tidak diketahui mengapa kalajengking berpendar di bawah radiasi ultraviolet, dan ini adalah salah satu bidang studi biologi yang tetap tanpa jawaban. Para ilmuwan di California telah menunjukkan fluoresensi ini dapat membantu kalajengking dalam mengenali dan mendeteksi sinar UV.
Jangan bingung fluoresensi dengan fosforesensi. Bahan fluorescent mengeluarkan radiasi ketika di bawah sinar UV sebagai akibat dari penyerapan foton menarik elektron dalam bahan. Ketika cahaya diambil, materi tidak lagi bersinar. Bahan berpendar menyimpan cahaya dan kemudian melepaskannya secara bertahap. Inilah sebabnya mengapa objek glow-in-the-dark terus bersinar, bahkan ketika lampu dimatikan.