Vad är en elektroforetisk mobilitetsförskjutningsanalys?

En analys är ett test utformat för att separera en cells ursprungliga delar i delar som är lätta att identifiera. Elektroforetisk mobilitetsförskjutningsanalys är ett experiment som använder elektricitet för att flytta makromolekyler, som proteiner, genom en gelmatris för att orsaka en separation mellan de olika makromolekylerna baserat på storlek. Precis som ett bilbatteri, är de negativa och positiva ändarna på motsatta sidor av analysen för elektroforetisk mobilitetsförskjutning, eller gelförskjutningsanalysen. Detta gör att elektricitet attraherar makromolekylerna baserat på laddning. Varje makromolekyl rör sig i en annan hastighet, eftersom de mindre upplever mindre störningar från gelén.

Flera steg krävs för att sätta upp en elektroforetisk mobilitetsförskjutningsanalys. Makromolekylerna som behöver separeras måste förberedas först. De flesta makromolekyler erhålls från levande celler och kräver specifika procedurer. För att få de delar som ska separeras krävs ofta en centrifug och en kemisk reaktion som bryter ner cellerna. Centrifugen kommer att snurra en flaska med hög hastighet och bilda en pellet av de makromolekyler som behövs. Detta löses upp och ofta tillsätts en färg eller annan etikett för att hjälpa till att spåra gelskiftanalysen.

Gelen, som ibland kallas sängen, måste också vara nygjord av en exakt blandning av pulveriserad agaros och vatten som snabbt förvandlas från vätska till gel. Vanligtvis kommer en elektroforetisk mobilitetsförskjutningsanalys att ha flera banor för separata analyser, som används för att jämföra olika makromolekylblandningar. Ett körfält är alltid inställt som en kontroll och har vanligtvis bara en sorts makromolekyl.

Strömkällan bör väljas noggrant och ansluts inte förrän allt är klart. Mängden tid som strömmen är på bestämmer mobilitetsförskjutningen av makromolekylerna. Det är viktigt att separera bitarna tillräckligt mycket för korrekt analys. Om strömmen inte är korrekt tidsinställd kommer framtida jämförelser också att vara felaktiga. Riktningen för makromolekylerna kommer att bestämmas av vilken laddning de har naturligt – de flesta rör sig mot den negativa änden.

Enkla genetiska tester och proteinanalyser görs vanligtvis med en elektroforetisk mobilitetsförskjutningsanalys. Detta visas av olika skift i olika körfält. Om en interaktion inträffar kombineras makromolekylerna och går långsammare genom matrisen jämfört med kontrollbanan med endast en makromolekyl. Gel shift-analyser används för att snabbt eliminera eller bekräfta genetiska resultat som komplicerade metoder kan ta längre tid att slutföra. De kan också avgöra om antikroppar, en immunsystemmakromolekyl, håller fast vid proteiner som kan användas för att bekämpa bakterier och virus.